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高效液相色譜法的發展歷史及應用特點

高效液相色譜法的發展歷史及應用特點

日期:2024-5-16

高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)(xiao)液(ye)(ye)相(xiang)色譜(pu)(pu)法自20世紀(ji)60年代問世以來,由(you)于使用了(le)(le)(le)(le)高(gao)(gao)壓(ya)輸液(ye)(ye)泵、全(quan)多(duo)孔微(wei)粒(li)填充柱和(he)高(gao)(gao)靈敏度(du)檢測(ce)器,實現(xian)了(le)(le)(le)(le)對樣(yang)品(pin)的(de)(de)(de)高(gao)(gao)速、高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)(xiao)和(he)高(gao)(gao)靈敏度(du)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)離(li)測(ce)定。高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)(xiao)液(ye)(ye)相(xiang)色譜(pu)(pu)由(you)于吸取了(le)(le)(le)(le)經(jing)(jing)典(dian)液(ye)(ye)相(xiang)色譜(pu)(pu)的(de)(de)(de)研(yan)制經(jing)(jing)驗,并引(yin)入微(wei)處理(li)機(ji)技術,極大(da)的(de)(de)(de)提高(gao)(gao)了(le)(le)(le)(le)儀器的(de)(de)(de)自動(dong)化(hua)水平和(he)分(fen)(fen)析(xi)精度(du)。現(xian)在用微(wei)處理(li)機(ji)控制的(de)(de)(de)高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)(xiao)液(ye)(ye)相(xiang)色譜(pu)(pu)儀,其(qi)自動(dong)化(hua)程(cheng)度(du)很高(gao)(gao),既能(neng)控制儀器的(de)(de)(de)操作參數(如溶劑(ji)梯度(du)洗脫、流動(dong)相(xiang)流量、柱溫、自動(dong)進(jin)樣(yang)、洗脫液(ye)(ye)收集(ji)、檢測(ce)器功能(neng)等(deng)),又能(neng)對獲得的(de)(de)(de)色譜(pu)(pu)圖進(jin)行(xing)收縮、放大(da)、疊加,以及(ji)對保留數據和(he)峰高(gao)(gao)、峰面積(ji)進(jin)行(xing)處理(li)等(deng),為(wei)色譜(pu)(pu)分(fen)(fen)析(xi)工作者提供了(le)(le)(le)(le)高(gao)(gao)效(xiao)(xiao)(xiao)率、功能(neng)齊(qi)全(quan)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)析(xi)工具。

高(gao)效(xiao)液(ye)相色譜法(fa)(fa)的(de)應用(yong)(yong)(yong)(yong)范圍十分(fen)(fen)廣泛,對樣品(pin)的(de)適用(yong)(yong)(yong)(yong)性(xing)廣,不(bu)(bu)受分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)對象揮發性(xing)和熱穩定(ding)(ding)性(xing)的(de)限制,幾乎所有的(de)化合物包括高(gao)沸點、極性(xing)、離子型化合物和大分(fen)(fen)子物質均可(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)高(gao)效(xiao)液(ye)相色譜法(fa)(fa)分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)測定(ding)(ding),因(yin)而(er)(er)彌(mi)補(bu)了氣(qi)(qi)相色譜法(fa)(fa)的(de)不(bu)(bu)足。在目前已(yi)知的(de)有機化合物中,可(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)氣(qi)(qi)相色譜分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)的(de)約占20% ,而(er)(er)80% 則需(xu)用(yong)(yong)(yong)(yong)高(gao)效(xiao)液(ye)相色譜來分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)。HPLC因(yin)其具有分(fen)(fen)離效(xiao)能(neng)高(gao)、分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)速度(du)快、檢測靈敏(min)度(du)好、能(neng)分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)和分(fen)(fen)離高(gao)沸點且不(bu)(bu)能(neng)氣(qi)(qi)化的(de)熱不(bu)(bu)穩定(ding)(ding)生理活性(xing)物質的(de)特點而(er)(er)被廣泛應用(yong)(yong)(yong)(yong)于生物化學、藥物及(ji)臨床分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi),世界各國己將該法(fa)(fa)收載于藥典。

特點:

1.高(gao)壓(ya)(ya):液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法以液(ye)體為(wei)流(liu)動相(xiang)(稱為(wei)載液(ye)),液(ye)體流(liu)經色(se)譜(pu)柱,受到阻(zu)力較大,為(wei)了迅速地(di)通過色(se)譜(pu)柱,必須(xu)對載液(ye)施加高(gao)壓(ya)(ya)。一般可達150~350×105Pa。

2. 高速:流動相在(zai)柱(zhu)內的(de)流速較經典色譜快得(de)多(duo),一般(ban)可達1~10ml/min。高效液(ye)相色譜法所需的(de)分析時間(jian)較之經典液(ye)相色譜法少得(de)多(duo),一般(ban)少于(yu) 1h 。

3. 高效(xiao):近來研究出許(xu)多新(xin)型固定相,使分離效(xiao)率大大提高。

4.高(gao)靈(ling)敏(min)(min)度:高(gao)效液相(xiang)色譜已(yi)廣泛采用高(gao)靈(ling)敏(min)(min)度的(de)檢測(ce)器(qi),進一步提(ti)高(gao)了分析的(de)靈(ling)敏(min)(min)度。如熒光(guang)檢測(ce)器(qi)靈(ling)敏(min)(min)度可達10-11g。另外,用樣(yang)量小,一般幾個微升。

5.適應范圍寬(kuan):氣相(xiang)色(se)(se)譜(pu)法與高(gao)(gao)(gao)效(xiao)(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)(se)譜(pu)法的比較:氣相(xiang)色(se)(se)譜(pu)法雖具有分離能力好(hao),靈敏度高(gao)(gao)(gao),分析(xi)速度快,操(cao)作方便等優(you)點,但是受技術條件(jian)的限制(zhi),沸點太(tai)高(gao)(gao)(gao)的物質或熱(re)穩(wen)定(ding)性(xing)差的物質都難于(yu)應用氣相(xiang)色(se)(se)譜(pu)法進(jin)行(xing)分析(xi)。而(er)高(gao)(gao)(gao)效(xiao)(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)(se)譜(pu)法,只要(yao)求試樣(yang)能制(zhi)成(cheng)溶液(ye),而(er)不需要(yao)氣化(hua),因此不受試樣(yang)揮發(fa)性(xing)的限制(zhi)。對(dui)于(yu)高(gao)(gao)(gao)沸點、熱(re)穩(wen)定(ding)性(xing)差、相(xiang)對(dui)分子量大(大于(yu) 400 以上(shang))的有機(ji)物(這(zhe)些(xie)物質幾(ji)乎(hu)占(zhan)有機(ji)物總數的 75% ~ 80% )原則上(shang)都可應用高(gao)(gao)(gao)效(xiao)(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)(se)譜(pu)法來進(jin)行(xing)分離、分析(xi)。 據統(tong)計,在已(yi)知化(hua)合物中,能用氣相(xiang)色(se)(se)譜(pu)分析(xi)的約占(zhan)20%,而(er)能用液(ye)相(xiang)色(se)(se)譜(pu)分析(xi)的約占(zhan)70~80%。

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