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液相色譜儀分析方法的開發流程

液相色譜儀分析方法的開發流程

日期:2024-5-28
我們作液相色譜儀分析先要查閱國家標準、行標或企業標準,并以此為依據進行色譜分析。那么,要開發一個液相色譜方法的話,往往是因為原方法分離效果差;或者沒人做過,查不到具體方法;再或者是未知化合物的方法開發。我們今天就介紹一下液相色譜的方法開發流程。

我們就以(yi)未知化合物為例。

分離模式的選擇

我們先測試樣品的溶解性:如果在烷烴試劑中溶解性好,那么可首選正相模式開發方法,色譜柱主要以硅膠柱為主,流動相(xiang)可以(yi)選擇正己烷-乙醇(chun)、二氯甲烷-甲醇(chun);

如果在二氯甲(jia)烷或(huo)乙(yi)醇(chun)(chun)中(zhong)溶解(jie)性好,那么可以選(xuan)用正相模式,或(huo)者反(fan)相模式中(zhong)的純有機模式,色譜柱可以用硅膠柱、C18或(huo)C8,反(fan)相的流動相可以用甲(jia)醇(chun)(chun)-乙(yi)腈、乙(yi)腈-二氯甲(jia)烷;

液相色譜儀分析方法的開發流程

如果在水、甲醇或乙腈中溶解性好,那么可以選用反相模式、Hilic模式或離子交換模式,反相流動相可以用水-甲醇、水-乙腈,HILIC的流動相可以用乙腈-水,離子交換流動相可以用緩沖鹽濃度梯度洗脫、或pH的(de)梯度洗脫。

反相流動相pH的選擇

如(ru)果是(shi)分析酸性化(hua)合(he)物(wu),我(wo)們(men)選擇(ze)流動(dong)相的pH應低于其pKa至少(shao)2個pH單位(wei);如(ru)果是(shi)分析堿性化(hua)合(he)物(wu),流動(dong)相的pH應高(gao)于其pKa至少(shao)2個pH單位(wei)。

液相色譜儀分析方法的開發流程

檢測器的選擇

確定待測物結構上是否有紫外強吸收化學鍵(異戊二烯),可以用DAD檢測器看一下紫外吸收強度范圍,選取合適的分析波長;如果結構上沒有雙鍵,則不能用紫外檢測器,可以考慮示差折光檢測器(RI);如果待測物沸點較高(大于400℃),則可以選擇蒸發光散射檢測器(ELSD)或電噴霧檢測器(qi)(CAD);如果需(xu)要(yao)確定分子量(liang),可以連接質譜檢測器(qi)。

液相色譜儀分析方法的開發流程

流動相梯度或等度條件的確定

我們可以(yi)先跑一(yi)個大(da)梯度(du),比如反相用(yong)水和乙腈流動相,可以(yi)用(yong)乙腈的比例從5%逐漸增至95%,根據出峰情況,再去(qu)優化放緩梯度(du)。

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